測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法
來源： http://98fo.cn/ 類別：實用技術 更新時間：2013-05-14 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網提供】 測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的原理：根據葉綠家對可見光的吸收光譜，利用分光光度計在某一特定波長下測定其吸光度，而後公式計算葉綠素含量。
根據朗伯―比爾定律，某有色溶液的吸光皮A應與其濃度c和液層厚度L成比例，即：
A＝KCL
式中lx為比例常數，當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，K為該物質的比吸收係數。各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長的吸光值而求得。
如(ru)果(guo)溶(rong)液(ye)中(zhong)有(you)數(shu)種(zhong)吸(xi)光(guang)物(wu)質(zhi)，則(ze)此(ci)混(hun)合(he)液(ye)在(zai)某(mou)一(yi)波(bo)長(chang)下(xia)的(de)總(zong)吸(xi)光(guang)度(du)等(deng)於(yu)各(ge)組(zu)分(fen)在(zai)相(xiang)應(ying)波(bo)長(chang)下(xia)吸(xi)光(guang)度(du)的(de)總(zong)和(he)，這(zhe)就(jiu)是(shi)吸(xi)光(guang)度(du)的(de)加(jia)和(he)性(xing)。如(ru)欲(yu)測(ce)定(ding)葉(ye)綠(lv)體(ti)色(se)素(su)混(hun)合(he)提(ti)取(qu)液(ye)中(zhong)葉(ye)綠(lv)素(su)a、b、葉黃素、胡蘿卜素的含量，隻需測定該提取液在3個特定波長下的吸光度A，並根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的比吸收係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時，為了排除類胡蘿卜素的幹擾，所用單色光應選擇葉綠索在紅光區的最大吸收峰。
儀器設備：1.分光光度計：1台；葉綠素檢測儀：1台。2.研缽：1台.3.員簡：1個。4.剪刀：1把。5.50mL量瓶：1個。6.玻璃棒。7.1cm漏鬥：1個。8.7cm濾紙：1張。9.滴管：1支。試劑：80％丙酮。材料：任何綠色植物組織或器官。
測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法步驟：
（一）研磨法玻璃棒。
7cm濾紙：1張。
1.取樣、剪碎、混勻，然後稱取新鮮樣品1.18g。
2.樣品置研缽中，加少量CaC03和石英砂及0.5mL純丙酮研成勻漿，再加80％丙酮10mL繼續研磨至組織變為白色。
3.取濾紙一張，放入漏鬥中用80％丙酮濕潤，把提取液倒入漏鬥中，濾入25mL量瓶裏，用少量丙酮衝洗研體數次，最後連殘渣起倒人漏鬥。
4.用滴管吸取80％丙酮，一滴一滴的將濾紙上的叫綠家提取液全部洗入量瓶內，直到濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用80％丙酮定容至25mL。
5.把葉綠體色素提取液倒人光徑1cm的比色杯內，分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定吸光度，以80％丙酮為空白對照，並於葉綠素檢測儀的測量值進行對比分析。
6.分別計算葉綠素)a、b)和葉綠素的總濃度(mg/L)，若用96％乙醇，需在波長665nm、649nm和470nm下測定吸光度，則計算葉綠素a、b和類胡蘿卜素含量，相加即得葉綠素總濃度。
7.求得色素濃度後冉按下式計算組織中各色家含量(用mg•g“鮮重或幹重表水)式中，C：葉綠體色素的濃度(mg/L)小w：鮮重(g)lv：提取液總體積(ml)；稀釋倍數。
（二）直接浸提法
1.將新鮮小麥M1片剪成0.2cm左方的細絲或小塊混合均勻後.稱取0.10―0.20825mL容量瓶或具塞刻度試管中。
2在容量瓶或試管中加入0.5mL純丙酮和10―15mL80％的丙酮，並仔細將就附在瓶壁邊緣的葉片碎末洗到丙酮溶液中去，蓋上瓶塞，室溫下置暗處浸提過夜4其間搖動3―4次。
3.次日取出容量瓶，觀察nl組織巳全部交白時，表示葉綠素已浸提幹淨，然後用80％丙酮定容至25mL刻度，過濾或離心後，與研磨法同樣進行比色測定。
（三）注意事項：
1.為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光進行。並盡可能縮短研磨時間2min為宜。
2.克接浸提法也可采用丙酮一乙醇―水混合液，其配製比例為：純丙酮：無水乙醇：蒸餾水。
3.若是幹材料，可經研磨過篩後，稱取0.10g左右、與鮮樣同法浸提(但不用加0.5mL純丙酮)。
4.用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)測(ce)定(ding)葉(ye)綠(lv)體(ti)色(se)素(su)含(han)量(liang)，對(dui)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)本(ben)身(shen)的(de)精(jing)確(que)性(xing)要(yao)求(qiu)較(jiao)高(gao)，分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)需(xu)對(dui)波(bo)長(chang)進(jin)行(xing)校(xiao)正(zheng)。校(xiao)正(zheng)的(de)方(fang)法(fa)除(chu)按(an)儀(yi)器(qi)說(shuo)明(ming)校(xiao)正(zheng)外(wai)，還(hai)應(ying)以(yi)純(chun)的(de)葉(ye)綠(lv)素(su)a和b來校正。因為即使用國產儀器中性能較好的7200型分光光度計，經校正後在660-700nm波段中的讀數誤差還可能有12nm，這對測定葉綠索a，b值已有影響，具體校正步驟可參照參文獻中的方法進行。
根據朗伯―比爾定律，某有色溶液的吸光皮A應與其濃度c和液層厚度L成比例，即：
A＝KCL
式中lx為比例常數，當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，K為該物質的比吸收係數。各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長的吸光值而求得。
如(ru)果(guo)溶(rong)液(ye)中(zhong)有(you)數(shu)種(zhong)吸(xi)光(guang)物(wu)質(zhi)，則(ze)此(ci)混(hun)合(he)液(ye)在(zai)某(mou)一(yi)波(bo)長(chang)下(xia)的(de)總(zong)吸(xi)光(guang)度(du)等(deng)於(yu)各(ge)組(zu)分(fen)在(zai)相(xiang)應(ying)波(bo)長(chang)下(xia)吸(xi)光(guang)度(du)的(de)總(zong)和(he)，這(zhe)就(jiu)是(shi)吸(xi)光(guang)度(du)的(de)加(jia)和(he)性(xing)。如(ru)欲(yu)測(ce)定(ding)葉(ye)綠(lv)體(ti)色(se)素(su)混(hun)合(he)提(ti)取(qu)液(ye)中(zhong)葉(ye)綠(lv)素(su)a、b、葉黃素、胡蘿卜素的含量，隻需測定該提取液在3個特定波長下的吸光度A，並根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的比吸收係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時，為了排除類胡蘿卜素的幹擾，所用單色光應選擇葉綠索在紅光區的最大吸收峰。
儀器設備：1.分光光度計：1台；葉綠素檢測儀：1台。2.研缽：1台.3.員簡：1個。4.剪刀：1把。5.50mL量瓶：1個。6.玻璃棒。7.1cm漏鬥：1個。8.7cm濾紙：1張。9.滴管：1支。試劑：80％丙酮。材料：任何綠色植物組織或器官。
測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法步驟：
（一）研磨法玻璃棒。
7cm濾紙：1張。
1.取樣、剪碎、混勻，然後稱取新鮮樣品1.18g。
2.樣品置研缽中，加少量CaC03和石英砂及0.5mL純丙酮研成勻漿，再加80％丙酮10mL繼續研磨至組織變為白色。
3.取濾紙一張，放入漏鬥中用80％丙酮濕潤，把提取液倒入漏鬥中，濾入25mL量瓶裏，用少量丙酮衝洗研體數次，最後連殘渣起倒人漏鬥。
4.用滴管吸取80％丙酮，一滴一滴的將濾紙上的叫綠家提取液全部洗入量瓶內，直到濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用80％丙酮定容至25mL。
5.把葉綠體色素提取液倒人光徑1cm的比色杯內，分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定吸光度，以80％丙酮為空白對照，並於葉綠素檢測儀的測量值進行對比分析。
6.分別計算葉綠素)a、b)和葉綠素的總濃度(mg/L)，若用96％乙醇，需在波長665nm、649nm和470nm下測定吸光度，則計算葉綠素a、b和類胡蘿卜素含量，相加即得葉綠素總濃度。
7.求得色素濃度後冉按下式計算組織中各色家含量(用mg•g“鮮重或幹重表水)式中，C：葉綠體色素的濃度(mg/L)小w：鮮重(g)lv：提取液總體積(ml)；稀釋倍數。
（二）直接浸提法
1.將新鮮小麥M1片剪成0.2cm左方的細絲或小塊混合均勻後.稱取0.10―0.20825mL容量瓶或具塞刻度試管中。
2在容量瓶或試管中加入0.5mL純丙酮和10―15mL80％的丙酮，並仔細將就附在瓶壁邊緣的葉片碎末洗到丙酮溶液中去，蓋上瓶塞，室溫下置暗處浸提過夜4其間搖動3―4次。
3.次日取出容量瓶，觀察nl組織巳全部交白時，表示葉綠素已浸提幹淨，然後用80％丙酮定容至25mL刻度，過濾或離心後，與研磨法同樣進行比色測定。
（三）注意事項：
1.為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光進行。並盡可能縮短研磨時間2min為宜。
2.克接浸提法也可采用丙酮一乙醇―水混合液，其配製比例為：純丙酮：無水乙醇：蒸餾水。
3.若是幹材料，可經研磨過篩後，稱取0.10g左右、與鮮樣同法浸提(但不用加0.5mL純丙酮)。
4.用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)測(ce)定(ding)葉(ye)綠(lv)體(ti)色(se)素(su)含(han)量(liang)，對(dui)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)本(ben)身(shen)的(de)精(jing)確(que)性(xing)要(yao)求(qiu)較(jiao)高(gao)，分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)需(xu)對(dui)波(bo)長(chang)進(jin)行(xing)校(xiao)正(zheng)。校(xiao)正(zheng)的(de)方(fang)法(fa)除(chu)按(an)儀(yi)器(qi)說(shuo)明(ming)校(xiao)正(zheng)外(wai)，還(hai)應(ying)以(yi)純(chun)的(de)葉(ye)綠(lv)素(su)a和b來校正。因為即使用國產儀器中性能較好的7200型分光光度計，經校正後在660-700nm波段中的讀數誤差還可能有12nm，這對測定葉綠索a，b值已有影響，具體校正步驟可參照參文獻中的方法進行。
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