以(yi)凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)測(ce)定(ding)氮(dan)含(han)量(liang)換(huan)算(suan)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)方(fang)法(fa)，是(shi)國(guo)際(ji)上(shang)通(tong)用(yong)的(de)標(biao)準(zhun)方(fang)法(fa)
，操(cao)作(zuo)簡(jian)單(dan)
，測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)重(zhong)複(fu)性(xing)和(he)重(zhong)現(xian)性(xing)都(dou)很(hen)好(hao)
，廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)各(ge)種(zhong)食(shi)品(pin)
、穀物、飼料等樣品的蛋白質含量測定。此法又分為常量、半微量
、微(wei)量(liang)法(fa)三(san)種(zhong)。國(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)規(gui)定(ding)為(wei)半(ban)微(wei)量(liang)凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)。其(qi)測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)相(xiang)同(tong)，主(zhu)要(yao)區(qu)別(bie)在(zai)於(yu)常(chang)量(liang)法(fa)的(de)樣(yang)品(pin)及(ji)試(shi)劑(ji)用(yong)量(liang)較(jiao)微(wei)量(liang)法(fa)多(duo)。而(er)微(wei)量(liang)法(fa)則(ze)具(ju)有(you)實(shi)驗(yan)規(gui)模(mo)小(xiao)
，實(shi)驗(yan)費(fei)用(yong)低(di)的(de)優(you)點(dian)。但(dan)微(wei)量(liang)法(fa)的(de)準(zhun)確(que)度(du)和(he)精(jing)密(mi)度(du)比(bi)常(chang)量(liang)法(fa)要(yao)差(cha)一(yi)些(xie)。凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)整(zheng)個(ge)測(ce)定(ding)過(guo)程(cheng)分(fen)為(wei)消(xiao)解(jie)
、蒸餾
、滴定三步。凱式定氮法包括消化爐和蒸餾裝置，它們的結合能夠讓實驗盡可能的簡單。　　

要使測定結果有更好的正確度、準確度和精準度，認真細致掌握測定的每個步驟
、各個細節及相應的注意事項
，就顯得尤為重要。　

實驗過程操作

1、主要試劑的配製

40%氫氧化鈉：化學純400g氫氧化鈉溶於1000ml無氨蒸餾水中。

2%硼酸：分析純20g硼酸溶於1000ml無氨蒸餾水中。

0.05mol/L鹽酸：分析純4.2ml鹽酸定容至1000ml，通過無水碳酸鈉標定。

混合指示劑：把溶解於95%乙醇的0.l%溴甲酚綠溶液5份和溶於95%乙醇的0.l%

甲基紅溶液1份混合而成.

2、實驗過程注意事項

(1)樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

固體樣品一般取樣範圍為0.20g~2.00g;半固體試樣一般取樣範圍為2.00g~5.00g;液體樣品取樣10.0mL~25.0mL(約相當氮30mg~40mg)。若檢測液體樣品，結果以g/100mL表示。

樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

(2)樣(yang)品(pin)放(fang)入(ru)定(ding)氮(dan)瓶(ping)內(nei)時(shi)，不(bu)要(yao)沾(zhan)附(fu)頸(jing)上(shang)。萬(wan)一(yi)沾(zhan)附(fu)可(ke)用(yong)少(shao)量(liang)水(shui)衝(chong)下(xia)，以(yi)免(mian)被(bei)檢(jian)樣(yang)消(xiao)化(hua)不(bu)完(wan)全(quan)

，結(jie)果(guo)偏(pian)低(di)
，或(huo)者(zhe)用(yong)濾(lv)紙(zhi)包(bao)裹(guo)好(hao)一(yi)起(qi)投(tou)入(ru)消(xiao)化(hua)，濾(lv)紙(zhi)影(ying)響(xiang)通(tong)過(guo)空(kong)白(bai)扣(kou)除(chu)。消(xiao)化(hua)時(shi)應(ying)注(zhu)意(yi)旋(xuan)轉(zhuan)凱(kai)氏(shi)燒(shao)瓶(ping)，將(jiang)附(fu)在(zai)瓶(ping)壁(bi)上(shang)的(de)碳(tan)粒(li)衝(chong)下(xia)，對(dui)樣(yang)品(pin)徹(che)底(di)消(xiao)化(hua)。若(ruo)樣(yang)品(pin)不(bu)易(yi)消(xiao)化(hua)至(zhi)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)


，可(ke)將(jiang)凱(kai)氏(shi)燒(shao)瓶(ping)中(zhong)溶(rong)液(ye)冷(leng)卻(que)，加(jia)入(ru)數(shu)滴(di)過(guo)氧(yang)化(hua)氫(qing)後(hou)
，再(zai)繼(ji)續(xu)加(jia)熱(re)消(xiao)化(hua)至(zhi)完(wan)全(quan)。

(3)xiaohuashi，buyaoyongqianghuo。ruoyangpinhantanggaohuohanzhijijiaoduoshi，zhuyikongzhijiarewendu
，yimiandaliangpaomopenchukaishishaoping，zaochengyangpinsunshi。kejiarushaoliangxinchunhuoyetishila，huoguixiaopaojijianshaopaomochansheng。zaizhenggexiaohuaguochengzhongbaochihehuandefeiteng，shihuolijizhongzaikaishipingdibu
，yimianfuzaibishangdedanbaizhizaiwuliusuancunzaideqingkuangxia
，shidanyousunshi。hainenggongsixiaojieluSH220或SH520能夠很好的解決此問題。

(4)ruliusuanqueshao
，guoduodeliusuanjiahuiyinqiandesunshi，zheyanghuixingchengliusuanqingjia
，erbuyuanzuoyong。yinci，dangliusuanguoduodebeixiaohaohuoyangpinzhongzhifanghanliangguogaoshi，yaozengjialiusuandeliang;加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點;催cui化hua劑ji硫liu酸suan銅tong在zai有you機ji物wu全quan部bu消xiao化hua後hou，溶rong液ye顯xian清qing澈che透tou明ming的de藍lan綠lv色se，可ke用yong它ta來lai指zhi示shi消xiao化hua終zhong點dian。此ci外wai
，硫liu酸suan銅tong還hai可ke用yong做zuo下xia一yi步bu蒸zheng餾liu時shi堿jian性xing反fan應ying的de指zhi示shi劑ji。過guo氧yang化hua氫qing，為wei氧yang化hua劑ji，有you助zhu於yu有you機ji物wu消xiao化hua，同tong時shi可ke以yi消xiao除chu消xiao化hua過guo程cheng中zhong的de氣qi泡pao現xian象xiang。

(5)xiangzhengliuqipingzhongjiarunongjianshi，wangwangchuxianhesechendianwu，zheshiyouyufenjiecujinjianyujiarudeliusuantongfanying，shengchengqingyanghuatong，jingjiarehouyoufenjieshengchengyanghuatongdechendian。youshitongliziyuanzuoyong，shengchengshenlansedejiehewu[Cu(NH3)4]2 ，加入氫氧化鈉是否足量,常常影響整個測定的順利進行。由反應原理可知，當氫氧化鈉足量時有黑色氧化銅生成而使溶液呈淡黑色;當氫氧化鈉量不足時就無黑色氧化銅產生而使溶液呈淡藍色，所以有無氧化銅顏色存在是判斷氫氧化鈉是否足量的標誌。

(6)yinzhengliushifanyingshideyalidayudaqiyali，gukejiangandaichu。suoyi
，zhengliushi
，zhengqiyaofashengjunyun，chongzu，zhengliuzhongbudetinghuoduanqi
，fouze，huifashengdaoxi。tingzhizhengliushi，youyufanyingshiwaicengdeyalituranjiangdi，keshiyetidaoxirufanyingshiwaiceng，suoyi，caozuoshi，yingxianjianglengningguanxiaduantigaoyemianbingqingxiguankou
，zaizhengyifenzhonghouguandiaoreyuan。zhengliushifouwanquan，keyongjingmiPH試shi紙zhi測ce冷leng凝ning管guan口kou的de冷leng凝ning液ye來lai測ce定ding，中zhong性xing則ze說shuo明ming已yi蒸zheng餾liu完wan全quan。一yi般ban情qing況kuang下xia建jian議yi使shi用yong半ban微wei量liang法fa，因yin為wei如ru果guo蒸zheng餾liu失shi敗bai的de話hua，半ban微wei量liang法fa還hai可ke繼ji續xu蒸zheng餾liu，而er常chang量liang法fa隻zhi好hao全quan部bu重zhong來lai，費fei時shi費fei力li。我wo們men使shi用yong海hai能nengK9840經過多次蒸餾吸收實驗達到理想效果。

(7)混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠
，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

(8)吸收液也可以用0.01當量的酸代表硼酸，過剩的酸液用0.01N堿(jian)液(ye)滴(di)定(ding)，而(er)以(yi)硼(peng)酸(suan)為(wei)氨(an)的(de)吸(xi)收(shou)液(ye)，可(ke)省(sheng)去(qu)標(biao)定(ding)堿(jian)液(ye)的(de)操(cao)作(zuo)

，且(qie)硼(peng)酸(suan)的(de)體(ti)積(ji)要(yao)求(qiu)並(bing)不(bu)嚴(yan)格(ge)，亦(yi)可(ke)免(mian)去(qu)用(yong)移(yi)液(ye)管(guan)
，操(cao)作(zuo)比(bi)較(jiao)簡(jian)便(bian)。另(ling)外(wai)，硼(peng)酸(suan)吸(xi)收(shou)液(ye)的(de)溫(wen)度(du)不(bu)應(ying)超(chao)過(guo)40℃
，否則氨吸收減弱，造成檢測結果偏低。可把接收瓶置於冷水浴中。

(9)在鹽酸標準溶液的配製時，必須將基準無水碳酸鈉於270-300℃灼燒至恒重後稱取所須用量，否則也會影響蛋白質測定結果的準確性。鹽酸標準溶液的濃度
，常量法中取0.1M比較合適


，半微量法中則在0.02～0.05M之間比較合適。