使用降落數值儀測定不同品種蘿卜澱粉酶活性
蘿卜屬十字花科蘿卜屬1、2a生草本植物,又名萊旅、蘆旅,是重要的世界性蔬菜。由於其生長適應性強,產量高,肉質根營養成分含量豐富,在中國、日本、韓國以及東南亞一些國家廣泛種植。蘿卜富含澱粉酶(不是澱粉)是一種超低熱量的蔬菜。由於其含富含粉酶,因此對胃部粘膜的修複具有很好的促進作用,能夠防止胃酸過多、胃炎及胃潰瘍,同時能夠增強消化機能。因此,蘿卜一直以來都被認為是有助消化的食品。
但是有關蘿卜澱粉酶的研究甚少,因此,該試驗以不同蘿卜類型品係及組合為試材,使用降落數值儀對不同蘿卜品種澱粉酶活性進行比較研究,為進一步開展蘿卜澱粉酶純化和理化性質研究及高澱粉酶活性品種選育提供基礎。
1 材料與方法
1.1試驗材料
供試25個蘿卜品種及組合為S01、S02、S03、S04、S05及A1~A20.試劑為麥芽糖、3,5-二硝基水楊酸、NaOH、酒石酸鉀鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉和澱粉等。
1.2試驗方法
1.2.1試驗設計田間試驗於2010年7月中旬播種,采用隨機區組設計,3次重複,共75個小區,小區麵積約4m2,株行距為40cm×50cm,常規管理。於采收期每個小區隨機選取3個蘿卜,不同部位取樣混合後作為1個樣品,重複2次。
1.2.2試劑配製標準麥芽糖溶液(1mg/mL):精確稱取100mg麥芽糖,用蒸餾水溶解並定容至100mL;3,5-二硝基水楊酸試劑:精確稱取1g3,5-二硝基水楊酸,溶於20mL2mol/LNaOH溶液中,加入50mL蒸餾水,再加入30g酒石酸鉀鈉,待溶解後用蒸餾水定容至100mL.蓋緊瓶塞,勿使CO2進入;0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩衝液:
A液(0.1mol/L檸檬酸):稱取C6H8O7・H2O21.01g,用蒸餾水溶解至1L.
B液(0.1mol/L檸檬酸鈉):稱取Na3C6H5O7・2H2O29.41g用蒸餾水定容至1L.取A液55mL與B液145mL混勻,即為0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩衝液;1%澱粉溶液:稱取1g澱粉溶於100mL0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩衝液中。
1.2.3樣品製備稱取1g左右蘿卜肉質根置於研缽中,加少量石英砂和2mL蒸餾水,研磨勻漿。將勻漿倒入離心管中,用6mL蒸餾水分次將殘渣洗入離心管。

提取液在室溫下放置提取15~20min,每隔數分鍾攪動1次,使其充分提取。然後在3000r/min轉速下離心10min,將上清液到入100mL容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶原液。吸取上述澱粉酶原液10mL,放入50mL容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻,即為澱粉酶稀釋液。
1.2.4麥芽糖標準曲線的製作精確稱取100mg麥芽糖,用蒸餾水溶解並定容至100mL即為標準麥芽糖溶液(1mg/mL):用移液器分別吸取0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8和2.0mL的麥芽糖標準液分別放置幹淨的具塞刻度試管中,加蒸餾水至2.0mL,混勻後分別加入2mL3,5-二硝基水楊酸試劑,搖勻,置沸水浴中煮沸5min.取出後流水冷卻,加蒸餾水定容至20mL.以1號管作為空白調零點,在540nm波長下比色測定。
1.3項目測定
利用降落數值儀測定蘿卜肉質根的澱粉酶總活性、α?澱粉酶活性及β?澱粉酶活性。活力計量單位:麥芽糖(mg)/(g・5min)樣品鮮重。
2 結果與分析
2.1麥芽糖標準曲線根據測定結果,采用Excel進行擬合,得擬合方程: Y=0.3456x-0.0391.

2.2不同蘿卜品種α,β?澱粉酶活性及總酶活性的比較由表1可知,不同蘿卜品種和組合的α?澱粉酶活性、β?澱粉酶活性和總澱粉酶活性均達到了顯著或極顯著的水平。25個品係及組合中總澱粉酶活性的變異範圍為麥芽糖43.65~86.70mg/(g・5min),β?澱粉酶活性的變異範圍為麥芽糖32.58~79.67mg/(g・5min)。品種S03的總澱粉酶活性和β?澱粉酶活性均最高分別為麥芽糖86.70和79.67mg/(g・5min),其後品種依次為A12、A17、A06和A19,而品種A04總澱粉酶活性和β?澱粉酶活性均最低。
3 討論與結論
測定澱粉酶活性的方法較多,如降落數值法、凝膠擴散法等,其中降落數值法靈敏、準確、精jing確que度du高gao,在zai國guo內nei有you許xu多duo學xue者zhe都dou運yun用yong降jiang落luo數shu值zhi法fa來lai研yan究jiu澱dian粉fen酶mei活huo性xing,但dan是shi操cao作zuo過guo程cheng複fu雜za且qie嚴yan格ge,為wei了le降jiang低di誤wu差cha,該gai研yan究jiu在zai整zheng個ge試shi驗yan過guo程cheng中zhong將jiang樣yang品pin,按an照zhao區qu組zu每mei次ci重zhong複fu為wei1組同時測定,共分3組zu同tong時shi利li用yong電dian腦nao定ding時shi精jing確que到dao每mei個ge樣yang品pin的de反fan應ying時shi間jian,而er且qie測ce定ding時shi均jun設she重zhong複fu,從cong多duo個ge角jiao度du較jiao少shao誤wu差cha,並bing利li用yong統tong計ji分fen析xi排pai除chu外wai界jie誤wu差cha,提ti高gao測ce定ding的de準zhun確que度du。該gai研yan究jiu結jie果guo證zheng明ming了le不bu同tong蘿luo卜bu品pin種zhong總zong澱dian粉fen酶mei活huo性xing、α?澱粉酶活性和β?澱粉酶活性的澱粉酶活性差異均顯著,也說明在遺傳上也存在著質的區別。



