如何提取及測定海帶中的葉綠素

海(hai)帶(dai)是(shi)一(yi)種(zhong)營(ying)養(yang)價(jia)值(zhi)很(hen)高(gao)的(de)蔬(shu)菜(cai)，由(you)於(yu)海(hai)水(shui)可(ke)被(bei)利(li)用(yong)的(de)光(guang)能(neng)要(yao)比(bi)陸(lu)地(di)上(shang)少(shao)得(de)多(duo)，要(yao)完(wan)成(cheng)能(neng)量(liang)的(de)轉(zhuan)換(huan)
，必(bi)須(xu)增(zeng)高(gao)參(can)與(yu)光(guang)合(he)作(zuo)用(yong)的(de)葉(ye)綠(lv)素(su)的(de)含(han)量(liang)。所(suo)以(yi)，一(yi)般(ban)來(lai)說(shuo)
，海(hai)帶(dai)中(zhong)葉(ye)綠(lv)素(su)和(he)其(qi)他(ta)輔(fu)助(zhu)色(se)素(su)的(de)含(han)量(liang)高(gao)於(yu)陸(lu)生(sheng)植(zhi)物(wu)。葉(ye)綠(lv)素(su)依(yi)其(qi)結(jie)構(gou)不(bu)同(tong)可(ke)分(fen)為(wei)葉(ye)綠(lv)素(su)a和葉綠素b
，其基本結構都是鎂結合的卟啉環。當前測定葉綠素的常規方法多為溶劑浸提-kejianfenguangguangdufa
，yongchaoshengbocuiqufenlichuyelvsu，ranhouyongqinglizizhihuanchumeilizi，zaiyongyuanzixishoufenguangguangdufacemeideliangjikejisuanchuhaidaizhongyelvsudehanliang，yijizhuanyede葉綠素測量儀法。這些方法都是葉綠素測定的最常用方法，我們在具體操作過程中，要按照不同的需求，進行合理的選擇。

葉綠素提取方法：稱取4g粉碎後的海帶於燒杯中

，加入30mL有機提取劑，用保鮮膜封口，室溫200W超聲波提取20min
，過濾

，收集濾液。移取8mL濾液於分液漏鬥中
，加入4mL的石油醚和等量飽和氯化鈉溶液萃取

，加12mL的超純水洗滌有機相，重複萃取兩次，洗去提取溶劑及無機態鹽類
，合並石油醚相。於石油醚相中加入0.9mol/L鹽酸15mL反萃取15min，分取水相，用超純水定容於50mL容量瓶中，用原子吸收分光光度計測定此溶液中鎂的質量濃度。測定條件為空氣-乙炔火焰，鎂波長285.2nm，狹縫寬度0.2nm
，燈電流3mA，燃燒器高度5.0mm。原子吸收法測定海帶中葉綠素含量的計算，見式(1)。葉綠素含量/(mg/g)=[C×V1×899.3×V3]/V2×m×24×1000(1)。式中：C為由標準曲線得被測試液中鎂的質量濃度/(μg/mL)；m為稱樣量/g；V1為混合提取液的總體積/mL；V2為移取石油醚相的體積/mL；V3為返萃水相的定容體積/mL
；899.3為葉綠素a
、葉綠素b的平均摩爾質量/(g/mol)；24為鎂的摩爾質量/(g/mol)。

caiyongchaoshengbotiqufaduihaidaizhongyelvsujinxingtiqu，yuanzixishouguangpufaduitiquchudeyelvsuzhongdemeilizijinxingceding，congerjianjiedechuhaidaizhongyelvsudehanliang。jieguobiaoming
，chaoshengbotiquyelvsudezuijiagongyitiaojian：以無水乙醇與丙酮體積比1:1的混合液為提取劑，按料液比2:15(g/mL)，在室溫下超聲波選擇200W的功率提取2次，每次20min。反萃取的最佳測定工藝條件：用濃度為0.9mol/L的鹽酸15mL進行反萃取15min。原子吸收法測定檢出限為0.008μg/mL，海帶中葉綠素的含量5.486mg/g
，相對標準偏差0.675%，回收率97.7%。此方法表明：原子吸收光譜法受幹擾程度小，且精密度、靈敏度和準確度較高。