食品中蛋白質的測定方法
來源: 類別:實用技術 更新時間:2007-10-08 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網提供】本標準適用於各類食品中蛋白質的測定。
1 原理
danbaizhishihandandeyoujihuahewu。shipinyuliusuanhecuihuajiyitongjiarexiaohua,shidanbaizhifenjie,fenjiedeanyuliusuanjieheshengchengliusuanan。ranhoujianhuazhengliushianyouli,yongpengsuanxishouhouzaiyiliusuanhuoyansuanbiaozhunrongyediding,genjusuandexiaohaoliangchengyihuansuanxishu,jiweidanbaizhihanliang。
2 試劑
所有試劑均用不含氨的蒸餾水配製。
2.1 硫酸銅。
2.2 硫酸鉀。
2.3 硫酸。
2.4 2%硼酸溶液。
2.5 混合指示液:1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。
2.6 40%氫氧化鈉溶液。
2.7 0.05N硫酸標準溶液或0.05N鹽酸標準溶液。
3 儀器
定氮蒸餾裝置:如圖所示。
(圖略)
4 操作方法
4.1 樣品處理:精密稱取0.2~2.0g固體樣品或2~5g半固體樣品或吸取10~20ml液體樣品(約相當氮30~40mg),移入幹燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻後於瓶口放一小漏鬥,將瓶以45°角(jiao)斜(xie)支(zhi)於(yu)有(you)小(xiao)孔(kong)的(de)石(shi)棉(mian)網(wang)上(shang)。小(xiao)心(xin)加(jia)熱(re),待(dai)內(nei)容(rong)物(wu)全(quan)部(bu)炭(tan)化(hua),泡(pao)沫(mo)完(wan)全(quan)停(ting)止(zhi)後(hou),加(jia)強(qiang)火(huo)力(li),並(bing)保(bao)持(chi)瓶(ping)內(nei)液(ye)體(ti)微(wei)沸(fei),至(zhi)液(ye)體(ti)呈(cheng)藍(lan)綠(lv)色(se)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)後(hou),再(zai)繼(ji)續(xu)加(jia)熱(re)0.5h。取下放冷,小心加20ml水。放冷後,移入100ml容量瓶中,並用少量水洗定氮瓶,洗液並入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。
4.2 按圖裝好定氮裝置,於水蒸氣發生瓶內裝水至約2/3處,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入數粒玻璃珠以防暴沸,用調壓器控製,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
4.3 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,並使冷凝管的下端插入液麵下,吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應室,並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,塞緊小玻杯的棒狀玻塞。將10ml 40%氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉(na)溶(rong)液(ye)倒(dao)入(ru)小(xiao)玻(bo)杯(bei),提(ti)起(qi)玻(bo)塞(sai)使(shi)其(qi)緩(huan)緩(huan)流(liu)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi),立(li)即(ji)將(jiang)玻(bo)塞(sai)蓋(gai)緊(jin),並(bing)加(jia)水(shui)於(yu)小(xiao)玻(bo)杯(bei)以(yi)防(fang)漏(lou)氣(qi)。夾(jia)緊(jin)螺(luo)旋(xuan)夾(jia),開(kai)始(shi)蒸(zheng)餾(liu)。蒸(zheng)氣(qi)通(tong)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi)使(shi)氨(an)通(tong)過(guo)冷(leng)凝(ning)管(guan)而(er)進(jin)入(ru)接(jie)收(shou)瓶(ping)內(nei),蒸(zheng)餾(liu)5min。移動接受瓶,使冷凝管下端離開液麵,再蒸餾1min。然後用少量水衝洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標準溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按4.3操作。
4.4 計算
式中:X――樣品中蛋白質的含量,%;
V1――樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
V2――試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
N――硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度;
0.014――1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當於氮克數;
m――樣品的質量(體積),g(ml);
F――氮換算為蛋白質的係數。蛋白質中的氮含量一般為15~17.6%,按16%計算乘以6.25即為蛋白質,乳製品為6.38,麵粉為5.70,玉米、高粱為6.24,花生為5.46,米為5.95,大豆及其製品為5.71,肉與肉製品為6.25,大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83,芝麻、向日葵為5.30。
附加說明:
本標準由全國衛生標準技術委員會食品衛生標準分委員會提出,由衛生部食品衛生監督檢驗所歸口。
本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。
1 原理
danbaizhishihandandeyoujihuahewu。shipinyuliusuanhecuihuajiyitongjiarexiaohua,shidanbaizhifenjie,fenjiedeanyuliusuanjieheshengchengliusuanan。ranhoujianhuazhengliushianyouli,yongpengsuanxishouhouzaiyiliusuanhuoyansuanbiaozhunrongyediding,genjusuandexiaohaoliangchengyihuansuanxishu,jiweidanbaizhihanliang。
2 試劑
所有試劑均用不含氨的蒸餾水配製。
2.1 硫酸銅。
2.2 硫酸鉀。
2.3 硫酸。
2.4 2%硼酸溶液。
2.5 混合指示液:1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。
2.6 40%氫氧化鈉溶液。
2.7 0.05N硫酸標準溶液或0.05N鹽酸標準溶液。
3 儀器
定氮蒸餾裝置:如圖所示。
(圖略)
4 操作方法
4.1 樣品處理:精密稱取0.2~2.0g固體樣品或2~5g半固體樣品或吸取10~20ml液體樣品(約相當氮30~40mg),移入幹燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻後於瓶口放一小漏鬥,將瓶以45°角(jiao)斜(xie)支(zhi)於(yu)有(you)小(xiao)孔(kong)的(de)石(shi)棉(mian)網(wang)上(shang)。小(xiao)心(xin)加(jia)熱(re),待(dai)內(nei)容(rong)物(wu)全(quan)部(bu)炭(tan)化(hua),泡(pao)沫(mo)完(wan)全(quan)停(ting)止(zhi)後(hou),加(jia)強(qiang)火(huo)力(li),並(bing)保(bao)持(chi)瓶(ping)內(nei)液(ye)體(ti)微(wei)沸(fei),至(zhi)液(ye)體(ti)呈(cheng)藍(lan)綠(lv)色(se)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)後(hou),再(zai)繼(ji)續(xu)加(jia)熱(re)0.5h。取下放冷,小心加20ml水。放冷後,移入100ml容量瓶中,並用少量水洗定氮瓶,洗液並入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。
4.2 按圖裝好定氮裝置,於水蒸氣發生瓶內裝水至約2/3處,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入數粒玻璃珠以防暴沸,用調壓器控製,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
4.3 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,並使冷凝管的下端插入液麵下,吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應室,並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,塞緊小玻杯的棒狀玻塞。將10ml 40%氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉(na)溶(rong)液(ye)倒(dao)入(ru)小(xiao)玻(bo)杯(bei),提(ti)起(qi)玻(bo)塞(sai)使(shi)其(qi)緩(huan)緩(huan)流(liu)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi),立(li)即(ji)將(jiang)玻(bo)塞(sai)蓋(gai)緊(jin),並(bing)加(jia)水(shui)於(yu)小(xiao)玻(bo)杯(bei)以(yi)防(fang)漏(lou)氣(qi)。夾(jia)緊(jin)螺(luo)旋(xuan)夾(jia),開(kai)始(shi)蒸(zheng)餾(liu)。蒸(zheng)氣(qi)通(tong)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi)使(shi)氨(an)通(tong)過(guo)冷(leng)凝(ning)管(guan)而(er)進(jin)入(ru)接(jie)收(shou)瓶(ping)內(nei),蒸(zheng)餾(liu)5min。移動接受瓶,使冷凝管下端離開液麵,再蒸餾1min。然後用少量水衝洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標準溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按4.3操作。
4.4 計算
式中:X――樣品中蛋白質的含量,%;
V1――樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
V2――試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
N――硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度;
0.014――1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當於氮克數;
m――樣品的質量(體積),g(ml);
F――氮換算為蛋白質的係數。蛋白質中的氮含量一般為15~17.6%,按16%計算乘以6.25即為蛋白質,乳製品為6.38,麵粉為5.70,玉米、高粱為6.24,花生為5.46,米為5.95,大豆及其製品為5.71,肉與肉製品為6.25,大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83,芝麻、向日葵為5.30。
附加說明:
本標準由全國衛生標準技術委員會食品衛生標準分委員會提出,由衛生部食品衛生監督檢驗所歸口。
本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。
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