【本資訊由中國糧油儀器網提供】1. 原理
分子量大於10，000道爾頓的多糖經80%乙醇沉澱後
，加入堿性銅試劑，選擇性地從其他高分子物質中沉澱出葡聚糖，沉澱部分與苯酚-H2SO4反應，生成有色物質
，在485nm條件下，有色物質的吸光度值與葡聚糖濃度成正比。
2. 適用範圍
參照AOAC方法。適用於檢測含有分子量大於10，000道爾頓葡聚糖的樣品。
3.儀器
（1） 分光光度計
（2） 離心機
（3） 旋轉混勻器
（4） 恒溫水浴鍋
4.試劑
除特殊說明外
，實驗用水為蒸餾水
，試劑為分析純。
（1） 80%乙醇：800ml無水乙醇加水200ml。
（2） 2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸餾水稀釋至1 L，加入固體無水硫酸鈉至飽和。
（3） 銅貯存液：稱取3.0 g CuSO4 ・5H2O，30.0 g檸檬酸鈉加水溶解至1 L。溶液可貯存2周。
（4） 銅應用溶液：取銅貯存液50 ml，加水50 ml混勻後加入無水硫酸鈉12.5 g，臨用新配。
（5） 洗滌液：取水50 ml，加入10 ml銅應用溶液
，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混勻。
（6） 1.8 mol/L H2SO4：取100ml濃硫酸用水稀釋至1L。
（7） 20 g/L苯酚溶液：稱取2.0g苯酚，加水溶解並稀釋至100ml，混勻備用。
（8） 葡聚糖標準液：稱取500mg葡聚糖（分子量500,000D）於稱量皿中
，105℃幹燥4h至恒重
，置於裝有幹燥矽膠的幹燥器中冷卻。準確稱取100mg幹燥後的葡聚糖
，用水定容至100ml，葡聚糖標準濃度為1.0 mg/ml。
（9） 葡聚糖標準應用液：吸取葡聚糖標準液10ml，用水稀釋10倍
，葡聚糖終濃度為0.1mg/ml。
5. 操作方法
5.1 樣品處理
（1） 樣品提取：稱取樣品1～5g，加水100ml，沸水浴加熱2h，冷卻至室溫
，定容至200ml （V1），混勻後過濾，棄初濾液
，收集餘下濾液。
（2） 沉澱高分子物質：準確吸取上述濾液100ml （V2）
，置於燒杯中，加熱濃縮至10ml，冷卻後
，加入無水乙醇40ml，將溶液轉至離心管中以3000rpm離心5min，棄上清液
，殘渣用80%乙醇洗滌3次，殘渣供沉澱葡聚糖之用。
（3） 沉澱葡聚糖：上述殘渣用水溶解，並定容至50ml （V3），混勻後過濾
，棄初始濾液後，取濾液2.0ml （V4）

，加入2.5mol/L NaOH 2.0ml
，Cu應用溶液2.0ml
，沸水浴中煮沸2mim，冷卻後以3000rpm離心5min，棄上清液
，殘渣用洗滌液洗滌3次
，殘渣供測定葡聚糖之用。
（4） 測定葡聚糖：上述殘渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解


，用水定容至100mL（V5）。準確吸取2.0ml（V6），置於25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液
，10ml濃硫酸

，沸水浴煮沸2分鍾，冷卻比色。從標準曲線上查得相應含量
，計算粗多糖含量。
5.2 標準曲線製備：
精密吸取葡聚糖標準應用液0.10
，0.20，0.40
，0.60
，0.80，1.00，1.50，2.00ml（分別相當於葡聚糖0.01
，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg），補充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml
，濃硫酸10ml，混勻，沸水浴2分鍾
，混勻，沸水浴2分鍾，冷卻後用分光光度計在485nm波長處以試劑空白溶液為參比

，測定吸光度值（A），以葡聚糖濃度為橫坐標，A為縱坐標繪製標準曲線。
6.計算
從標準曲線上查得樣品相應含量，計算粗多糖含量。 葡聚糖（%）=
c×V5×V3×V1×0.1
=
c×250
………………………（1）

V6×V4×V2×m
m


公式中：c--從標準曲線上查得樣品測定管中葡聚糖含量

，mg；
V1--樣品提取時定容體積，ml
；
V2--沉澱高分子物質取液量
，ml；
V3 --沉澱葡聚糖時定容量，ml
；
V4 --沉澱葡聚糖時取液量，ml；
V5 --測定葡聚糖時定容體積，ml；
V6 --樣品比色管中取樣液體積
，ml
；
m--樣品稱量質量，g
；
0.1--將mg/g 換算成g/100g 的係數。
7.注意事項
（1） 苯酚-H2SO4溶液可以和多種糖類進行顯色反應，常用於總糖的測定。所以測定過程中應注意容器及試劑中其他糖類的幹擾。
（2） 苯酚-H2SO4溶(rong)液(ye)和(he)不(bu)同(tong)類(lei)的(de)糖(tang)反(fan)應(ying)，顯(xian)色(se)的(de)強(qiang)度(du)略(lve)有(you)不(bu)同(tong)

，反(fan)映(ying)在(zai)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)斜(xie)率(lv)不(bu)同(tong)。如(ru)果(guo)已(yi)知(zhi)樣(yang)品(pin)中(zhong)糖(tang)的(de)結(jie)構(gou)
，應(ying)盡(jin)量(liang)以(yi)同(tong)類(lei)糖(tang)的(de)純(chun)品(pin)做(zuo)標(biao)準(zhun)品(pin)
，或(huo)以(yi)含(han)有(you)已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)同(tong)類(lei)產(chan)品(pin)做(zuo)對(dui)照(zhao)品(pin)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)分(fen)析(xi)；如果樣品中糖的類型未知或結構多樣，則隻能以葡萄糖計或其他糖計報告結果。
（3） 試驗證明葡萄糖、果糖等單糖，蔗糖、乳糖等雙糖、低聚糖--棉子糖，澱粉、糊精等多糖及甜味劑糖精不幹擾粗多糖測定。
（4） 本方法由北京市衛生防疫站建立
，經中國預防醫學科學院營養與食品衛生研究所驗證。