heidouya
，bingbushiwomentongchangsuoshuodedouya，biputongdeyingyangchengfenhanlianggaohenduo
，youqishilimiandeyelvsuhanliang，gengshizaihenduoshucaizhongzhanjubangshou，zhexiedoushijingguoyixiliedeyanjiushiyanzhengshi，youqishijindai葉綠素儀使用的成熟，使得對黑豆芽中葉綠素的研究更加廣泛
，下麵我們一起看下黑豆芽的葉綠素含量研究方法。

黑豆芽
，俗稱豆苗

，口感鮮嫩，營養豐富，富含鈣、磷
、鐵、鉀等礦物質及多種維生素；而且還具有很高的藥用價值，其性微涼，味甘，有活血利水、清熱消腫、補肝明目的功效。更為重要的是黑豆芽富含葉綠素。葉綠素分子結構與人體內的血液分子相似
，非常易溶入紅細胞中，能抑製細菌
、排出毒素
，有“綠色血液”之稱。

研yan究jiu表biao明ming
，豆dou芽ya中zhong的de葉ye綠lv素su能neng分fen解jie人ren體ti內nei的de亞ya硝xiao酸suan胺an
，能neng夠gou起qi到dao預yu防fang直zhi腸chang癌ai等deng多duo種zhong消xiao化hua道dao惡e性xing腫zhong瘤liu的de作zuo用yong。因yin此ci

，研yan究jiu黑hei豆dou芽ya的de葉ye綠lv素su測ce定ding提ti取qu方fang法fa
，對dui於yu提ti高gao其qi品pin質zhi和he黑hei豆dou芽ya葉ye綠lv素su深shen度du開kai發fa具ju有you重zhong要yao意yi義yi。關guan於yu葉ye綠lv素su含han量liang測ce定ding方fang法fa使shi用yong較jiao多duo的de是shiArnon法，但是Arnon法需要把植物材料研磨和去殘渣，提取時間長，工作量和操作誤差大。20世紀80年代初張憲政提出了丙酮乙醇混合液浸提法
，證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性，進一步研究後發現，混合液法比傳統Arnon法fa提ti取qu葉ye綠lv素su效xiao率lv高gao，穩wen定ding性xing好hao，並bing且qie洪hong法fa水shui等deng發fa現xian丙bing酮tong與yu乙yi醇chun在zai等deng濃nong度du混hun合he時shi提ti取qu效xiao果guo最zui好hao，明ming華hua等deng認ren為wei浸jin提ti法fa要yao優you於yu研yan磨mo法fa，混hun合he液ye浸jin提ti葉ye綠lv素su比bi單dan獨du用yong丙bing酮tong或huo乙yi醇chun浸jin提ti快kuai，葉ye片pian冷leng凍dong處chu理li後hou，快kuai速su浸jin提ti能neng夠gou縮suo短duan葉ye綠lv素su浸jin提ti時shi間jian。目mu前qian，關guan於yu芽ya菜cai葉ye綠lv素su提ti取qu方fang法fa鮮xian見jian報bao道dao

，本ben文wen以yi常chang規gui的deArnon法為基礎，對研磨法和混合液浸提法進行了研究以探討黑豆芽葉綠素含量測定方法。

1材料與方法

1.1 材料

、儀器
、試劑

黑豆芽購於市場；分光光度計：浙江托普糧食儀器

；萬分之一天平：托普儀器；丙酮
、乙醇：分析純，按體積比配製浸提液：95%乙醇，丙酮∶乙醇=1∶1，80 %丙酮分別用A、B
、C 表示。

1.2 方法

預處理樣品

，取黑豆芽適量，用紗布或吸水紙吸幹表麵的水分
，將子葉等剪成小於 2 mm 碎條
， 混勻，分成2份。提取測量
，一份在室溫（25℃）下， 立即用研磨法和直接浸提法（A、B、C 3 種提取液）提取葉綠素。

其中浸提法，稱取1g處理好的樣品置於50mL容量瓶中加入相應提取液
，定容
，混勻，封口，置於黑暗條件下直接浸提。待組織完全變白，分別在波長663、645、470 nm 下測定吸光度值。另一份用天平精準稱取（1g，9 份），分別裝袋
，密封好
，放到冰箱冷凍6h
，取出以浸提法測定吸光度值。浸提法、研磨法、冷凍浸提法每個處理各重複3次。

1.3 數據處理

葉綠素含量的計算：Ca=12.7A663-2.69A645；式中：Ca為葉綠素a濃度，（mg/L）；Cb=22.9A645-4.68A663；式中：Cb為葉綠素 b 濃度，（mg/L）
；C（a＋b）=Ca+Cb；式中：C（a＋b）為葉綠素總濃度

，（mg/L）
；葉綠素的含量（/mg/g）=[葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數]/樣品鮮重；所有數據處理用SPSS13.0統計軟件完成。

2結果與分析

2.1 黑豆芽葉綠素含量

各種方法提取結果見表1。

由表1可見，黑豆芽（不包括胚軸和胚根）葉綠素含量為0.1677mg/g（鮮重）
，a/b 為2.524。

2.2 不同提取方法的提取效果比較

研磨法、浸提法、冷凍浸提法3種提取方法，對於葉綠素a
、b 提取結果表現一致，以冷凍浸提法提取效果最好，其次為研磨法，再次為浸提法表2）。

jintifatiquxiaoguozuicha，yifangmiankenengtiqubuwanquan，yekenengzaitiqudeguochengzhongyelvsuyoufenjie，xiangduilengdongjintifa
，youyujingguolelengdongguochengposuilexibao，tiquwanquanerqietiquguochengkuaijianshaoleyelvsufenjie
，xiaoguozuihao。yanmofazaiyanmo、過guo濾lv等deng操cao作zuo的de過guo程cheng中zhong有you損sun失shi，而er且qie提ti取qu時shi間jian過guo程cheng長chang造zao成cheng弱ruo光guang下xia葉ye綠lv素su的de分fen解jie
，效xiao果guo不bu及ji冷leng凍dong浸jin提ti法fa。葉ye綠lv素su含han量liang提ti取qu效xiao果guo的de單dan變bian量liang方fang差cha分fen析xi
，見jian表biao3。

由表3單變量方差分析表明，葉綠素 a Sig.=0.749，P>0.05，葉綠素 b Sig.=0 .145
，P>0.05，即不同提取方法間差異不顯著。

2.3 不同提取液提取效果

比較不同提取液提取效果比較，見表4。

由表4可見

，不同提取液提取效果
，對於葉綠素a、b 提取結果表現一致
，以 95 %乙醇提取效果最好
，其次乙醇丙酮 1∶1 混合，再次為 80 %丙酮。由表 2 單變量方差分析表明

，葉綠素 a Sig.=0.000，P<0.01，葉綠素b表1 黑豆芽葉綠素含量測量結果Sig.=0.001，P<0.01，即不同提取液提取效果差異極顯著。進一步進行不同提取液提取效果多重比較分析表明（表5）。

由表5可知
，除葉綠素 b 丙酮乙醇 1∶1 混合提取液和 80 %丙酮提取液間差異不顯著，其餘各處理間差異顯著。單種提取液 95 %乙醇提取效果最好，與明華等對玉米葉葉綠素提取研究結論一致，但乙醇丙酮1∶1混合液的提取效果不及 95 %乙醇，又與明華、李得孝結論不一致。

由表6對95%乙醇提取液的3種方法提取效果比較也可看出，提取黑豆芽葉綠素以95%乙醇為提取液，以冷凍浸提效果最好。

3 結論與討論

1）研磨法
、浸提法、冷凍浸提法3種方法提取黑豆芽葉綠素
，對於葉綠素a、b提取結果表現一致
，以冷凍浸提法提取效果最好，其次為研磨法，再次為浸提法
，但不同提取方法間差異不顯著。盡管 3 種方法提取效果差異不顯著，但研磨法工作量大，提取時間長
；浸提法提取值偏低；冷凍浸提法速度快且效果好，故在黑豆芽葉綠素提取中可采用冷凍浸提法。

2）3 種提取液提取黑豆芽葉綠素
，葉綠素a、b提取結果表現一致，以95%乙醇提取效果最好，其次乙醇丙酮1∶1混合液，再次為80%丙酮，且3種提取液提取效果差異極顯著。結合上文分析黑豆芽葉綠素以95%乙醇為提取液，以冷凍浸提效果最好。

3）本文在冷凍浸提中並未對冷凍處理的時間進行深入研究，在對混合提取液的研究中也僅對乙醇丙酮1∶1 混合比例進行了研究，有學者認為乙醇丙酮1∶2提取效果好等。因此，關於此方麵的工作還需進一步研究。