葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
對葉綠素的研究一直是人們極其關注的課題。葉綠素含量測定方法主要有分光光度法和活體葉綠素儀法兩大類,後來又發展了光聲光譜法。但是,用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標,並且不同種類植物葉片中的色素指標與實際葉綠素含量之間的關係方程式不同,即不能用一種關係來轉換不同植物的色素含量。在日常實驗中普遍采用分光光度法,用的較多的是Arnon法。Arnon法需要把植物材料研磨,經過過濾或離心長,在操除渣、移液、定容、比色等過程,工作量大,提取時間作過程中誤差較大,且易受光氧化的破壞,不適於對田間大量樣品的測定和大量葉綠素的提取,並且也不適合大批量樣本的應急檢測。後來又提出了丙酮乙醇混合液浸提法,證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性。進一步研究後發現,混合液法比傳統Arnon法提取葉綠素效率高,穩定性好。
選材：剪取葉片,洗淨後棄除葉柄和中脈,然後用紗布或吸水紙將葉片表麵的水分吸幹。為了試驗的精確度更高,我們在取樣時僅取每片葉的中間部位,並用SPAD-502測定其葉綠素相對含量值,使其偏差保持在(-5,+5)之間,超出範圍者棄掉。把挑選的葉片剪成小於2mm碎條,混勻。分兩份,一份在室溫(25℃)下,立即用研磨法(80%丙酮,95%乙醇)和直接浸提法(8種提取液)提取葉綠素;另一份每次用千分之一天平精準稱取(200 mg,稱取24份;1 g,稱取6份),分別裝袋,密封好,儲放到冰箱中備用。為增加不同測定方法之間可比性,樣品在冷凍前稱量分裝好。
浸提法:分別於容量瓶中加入15mL提取液,把葉片剪成寬度小於2mm的細絲或小塊,混勻,分別準確稱取200mg放入盛有提取液的容量瓶中,封口,置於黑暗條件下直接浸提。研磨法每個處理重複3次。室溫試驗時,按8種提取液分8組,每組12個50mL的容量瓶,分別按照上述方法加入葉片和各浸提液,並計時,在室溫黑暗條件下直接浸提葉綠素,並不時搖動。分別於10h、13h、16h和48h時,每組各取出3個容量瓶,定容至50mL後在645nm和663nm波長下測定吸光度值。取出冷凍20h的葉片按照如上方法和程序或研磨或浸提。每個處理3個重複,浸提在50℃水浴中進行,用肉眼觀察葉組織完全變白,即說明浸提完全,取出冷卻後定容,在645 nm和663 nm波長下測定吸光度值。
葉綠素儀：現在市麵上最流行的莫過於SPAD502。SPAD502是有日本柯尼卡美能達研製生產的，SPAD502通過測量葉子對兩個波長段裏的吸收率，來評估當前葉子中的葉綠素的相對含量。該儀器擁有小巧的機身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋並帶到現場進行測量，因此又叫做手持葉綠素儀。葉ye綠lv素su儀yi操cao作zuo也ye非fei常chang方fang便bian，你ni隻zhi需xu將jiang葉ye片pian插cha入ru並bing合he上shang測ce量liang探tan頭tou即ji可ke，無wu需xu將jiang葉ye片pian剪jian下xia，這zhe樣yang就jiu可ke以yi在zai作zuo物wu的de生sheng長chang過guo程cheng中zhong全quan程cheng對dui特te定ding的de葉ye片pian進jin行xing監jian測ce，從cong而er得de到dao更geng科ke學xue的de分fen析xi結jie果guo。因yin此ci，葉ye綠lv素su能neng夠gou對dui葉ye片pian進jin行xing無wu損sun測ce定ding，保bao護hu了le葉ye片pian本ben身shen。
這(zhe)兩(liang)種(zhong)方(fang)法(fa)各(ge)有(you)優(you)勢(shi)，浸(jin)提(ti)法(fa)提(ti)取(qu)時(shi)受(shou)很(hen)多(duo)試(shi)劑(ji)的(de)影(ying)響(xiang)，因(yin)此(ci)在(zai)使(shi)用(yong)試(shi)劑(ji)時(shi)一(yi)定(ding)要(yao)謹(jin)慎(shen)，另(ling)外(wai)，浸(jin)提(ti)法(fa)測(ce)定(ding)時(shi)如(ru)果(guo)采(cai)用(yong)冷(leng)凍(dong)處(chu)理(li)，可(ke)以(yi)縮(suo)短(duan)浸(jin)提(ti)時(shi)間(jian)，但(dan)是(shi)其(qi)測(ce)定(ding)值(zhi)會(hui)變(bian)低(di)。而(er)用(yong)SPAD502測定則操作簡單，結果精確，但是該儀器價格昂貴。因此我們要根據實際需求，來選擇測定方法。
