電泳技術原理和分類
電泳法,是指帶電荷的供試品(蛋白質、核苷酸等)在惰性支持介質(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)zhong,yudianchangdezuoyongxia,xiangqiduiyingdedianjifangxiangangezidesudujinxingyongdong,shizufenfenlichengxiazhaidequdai,yongshiyidejiancefangfajiluqidianyongqudaitupuhuojisuanqibaifenhanliangdefangfa。
電泳技術的基本原理和分類
在電場中,推動帶電質點運動的力(F)等於質點所帶淨電荷量(Q)與電場強度(E)的乘積。F=QE質點的前移同樣要受到阻力(F)的影響,對於一個球形質點,服從 Stoke定律,即:F′=6πrην式中r為質點半徑,η為介質粘度,ν為質點移動速度,當質點在電場中作穩定運動時:
F=F′即 QE=6πrην
kejian,qiuxingzhidiandeqianyilv,shouxianqujueyuzishenzhuangtai,jiyusuodaidianliangchengzhengbi,yuqibanjingjijiezhizhanduchengfanbi。chulezishenzhuangtaideyinsuwai,dianyongtixizhongqitayinsuyeyingxiangzhidiandedianyongqianyilv。
電泳法可分為自由電泳(無支持體)及區帶電泳(有支持體)兩大類。前者包括 Tise-leas式微量電泳、顯微電泳、等電聚焦電泳、等速電泳及密度梯度電泳。區帶電泳則包括濾紙電泳(常壓及高壓)、薄層電泳(薄膜及薄板)、凝膠電泳(瓊脂、瓊脂糖、澱粉膠、聚丙烯酰胺凝膠)等。
自由電泳法的發展並不迅速,因為其電泳儀構造複雜、tijipangda,caozuoyaoqiuyange,jiageangguideng。erqudaidianyongkeyonggezhongleixingdewuzhizuozhichiti,qiyingyongbijiaoguangfan。benjiejinduichangyongdejizhongqudaidianyongfenbiejiayixushu。
影響電泳遷移率的因素
⒈電場強度 電場強度是指單位長度(cm)的電位降,也稱電勢梯度。如以濾紙作支持物,其兩端浸入到電極液中,電極液與濾紙交界麵的紙長為 20cm,測得的電位降為 200V,那麼電場強度為200V/20cm=10V/cm。當電壓在500V以下,電場強度在 2-10v/cm 時為常壓電泳。電壓在 500V 以上,電場強度在20-200V/cm 時為高壓電泳。電場強度大,帶電質點的遷移率加速,因此省時,但因產生大量熱量,應配備冷卻裝置以維持恒溫。
⒉溶液的pH值 溶液的pH決定被分離物質的解離程度和質點的帶電性質及所帶淨電荷量。例如蛋白質分子,它是既有酸性基團(-COOH),又有堿性基團(-NH2)的兩性電解質,在某一溶液中所帶正負電荷相等,即分子的淨電荷等於零,此時,蛋白質在電場中不再移動,溶液的這一pH值為該蛋白質的等電點(isoelctric point,pI)。若溶液pH處於等電點酸側,即pH<pl,則蛋白質帶正電荷,在電場中向負極移動。若溶液pH處於等電點堿側,即pH>pl,則蛋白質帶負電荷,向正極移動。溶液的pH離pl越遠,質點所帶淨電荷越多,電泳遷移率越大。因此在電泳時,應根據樣品性質,選擇合適的pH值緩衝液。
⒊溶液的離子強度 dianyongyezhongdelizinongduzengjiashihuiyinqizhidianqianyilvdejiangdi。qiyuanyinshidaidianzhidianxiyinxiangfanfuhedelizijujiqizhouwei,xingchengyigeyuyundongzhidianfuhexiangfandelizifen(ionic atmosphere),lizifenbujinjiangdizhidiandedaidianliang,tongshizengjiazhidianqianyidezuli,shenzhishiqibunengyongdong。ranerlizinongduguodi,huijiangdihuanchongyedezongnongdujihuanchongrongliang,buyiweichirongyede pH值,影響質點的帶電量,改變泳動速度。離子的這種障礙效應與其濃度和價數相關。可用離子強度 I表示。
⒋電滲 在電場作用下液體對於固體支持物的相對移動稱為電滲(electro-osmosis)。其qi產chan生sheng的de原yuan因yin是shi固gu體ti支zhi持chi物wu多duo孔kong,且qie帶dai有you可ke解jie離li的de化hua學xue基ji團tuan,因yin此ci常chang吸xi附fu溶rong液ye中zhong的de正zheng離li子zi或huo負fu離li子zi,使shi溶rong液ye相xiang對dui帶dai負fu電dian或huo正zheng電dian。如ru以yi濾lv紙zhi作zuo支zhi持chi物wu時shi,紙zhi上shang纖xian維wei素su吸xi附fuOH 帶負電荷,與紙接觸的水溶液因產生H3O+,帶dai正zheng電dian荷he移yi向xiang負fu極ji,若ruo質zhi點dian原yuan來lai在zai電dian場chang中zhong移yi向xiang負fu極ji,結jie果guo質zhi點dian的de表biao現xian速su度du比bi其qi固gu有you速su度du要yao快kuai,若ruo質zhi點dian原yuan來lai移yi向xiang正zheng極ji,表biao現xian速su度du比bi其qi固gu有you速su度du要yao慢man,可ke見jian應ying盡jin可ke能neng選xuan擇ze低di電dian滲shen作zuo用yong的de支zhi持chi物wu以yi減jian少shao電dian滲shen的de影ying響xiang。http://www.98fo.cn



